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端粒顯示實驗
發(fā)布時間： 2022-12-01 點擊次數(shù)： 789次簡介
端粒（telomere）是真核細胞染色體末端的 DNA 重復序列，它與多種端粒結合蛋白結合在一起，發(fā)揮重要的生物學功能，在細胞分裂的過程中，盡管端粒也會不斷的縮短，但可以通過端粒酶的催化，以自身 RNA 為模板進行補充，從而代償了這一損失。
端粒的功能保護染色體末端完整性，穩(wěn)定染色體，保障染色體 DNA 在復制的過程中不被縮短，保護染色體結構基因，防止基因組 DNA 降解、防止染色體末端融合，調(diào)節(jié)細胞生長、衰老等作用。
目前，用于端粒顯示實驗的方法主要有 3 種：Southern印跡法、Q-FISH法和qPCR法。
原理
Southern印跡法檢測端粒長度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復序列可存在差異，在同一種生物體內(nèi)為特定序列，如人端粒是由 6 個堿基重復序列（TTAGGG）和結合蛋白組成。通過與放射性同位素 32P 標記的探針 32P-（TTAGGG）n，檢測末端限制性片段（terminal restriction fragments，TRF）的長度分布情況，并計算出端粒長度的平均值。Q-FISH法檢測端粒形態(tài)及長度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復序列可存在差異，但在同一種生物體內(nèi)為特定序列，如人端粒是由 6 個堿基重復序列（TTAGGG）和結合蛋白組成。因此，對于端粒長度的檢測，傳統(tǒng)上可以對上述重復序列設計探針，采用核酸分子雜交技術進行測量。QPCR法檢測端粒長度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復序列可存在差異，但在同一種生物體內(nèi)為特定序列，如人端粒是由 6 個堿基重復序列（TTAGGG）和結合蛋白組成。因此，對于端粒長度的檢測，傳統(tǒng)上可以對上述重復序列設計探針，采用核酸分子雜交技術進行測量。基于一個細胞中端粒長度的均值與端粒-單拷貝基因比率（Telomere-to-Single Copy Gene ratio，T/S 比率）有關的證據(jù)，通過測量和計算出 T/S 比率，從而測量出端粒的長度。
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