国产精品免费无遮挡无码永久视频,交换娇妻系列38部分阅读,天天AV天天翘天天综合网,丰满护士巨好爽好大乳小说

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法

    消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法

    發(fā)布時間: 2023-06-28  點(diǎn)擊次數(shù): 1193次
    非特異性擴(kuò)增,即進(jìn)行 PCR 所擴(kuò)增出來的條帶不是所要的,引物與模板在非目的條帶處有錯配,導(dǎo)致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體,即引物在退火過程中產(chǎn)生了 hairpin 結(jié)構(gòu)或其他二級結(jié)構(gòu),或者引物在模板的某些位置非特異性地結(jié)合,也同樣會產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。PCR 產(chǎn)物都是通過引物延伸產(chǎn)生的。當(dāng)引物產(chǎn)生了二聚體或者非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物之后,引物本身就無法再延伸形成 PCR 產(chǎn)物了,這樣的情況下,非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物越是多,那目的產(chǎn)物就越是少。如果在 qPCR 過程中,就會在熔解曲線中形成雙峰。

    消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法:
    1、引物設(shè)計的過程中要用 Primer premier 5.0 來驗證一下二聚體;
     
    2、 引物合成后,先做一次梯度 PCR,檢測最合適的退火溫度,一般高退火溫度可以提高引 物對模板的特異性從而降低引物二聚體;
     
    3、 降低 Mg2+濃度,鎂離子濃度高,會導(dǎo)致大量的非特異性擴(kuò)增,但是沒有鎂離子的話,也會導(dǎo)致 Taq 酶的失活;
     
    4、降低 dNTP 濃度,dNTP 也是非特異性擴(kuò)增的一個罪魁禍?zhǔn)?,降低它的濃度,也能有效降低二聚體及其他非特異性擴(kuò)增;
     
    5、降低引物濃度,一般的 PCR 引物都是過量的,降低了引物濃度自然也能降低引物之間形成二級結(jié)構(gòu)的可能性;
     
    6、提高退火溫度,這個道理很簡單,引物的退火溫度提高,引物間的二級結(jié)構(gòu)形成可能性就會降低;
     
    7、延長退火時間,這個也可以減弱引物間結(jié)合的可能性;
     
    8、DMSO 及甜菜堿,這些 PCR 促進(jìn)劑,主要是用于 CG 含量高的模板上,降低 DNA 的二級結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,但根據(jù)經(jīng)驗,加入 DMSO 之后需要同時提高一點(diǎn)退火溫度來補(bǔ)平(qPCR 不太適用);
     
    9、熱啟動法,通過 95℃的高溫?zé)釂樱邷亟怄?,使得引物間的二級結(jié)構(gòu)破壞,以此降低二聚體產(chǎn)生。


    深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


產(chǎn)品中心 Products
亚洲精品无码葡京AV天堂| 人妻人人做人做人人爱| 19岁女RAPPER潮水欢迎你| 丰满少妇被猛烈进出69影院| 亚洲精华国产精华液| 国内少妇人妻偷人精品免费视频| 99精品亚洲AV无码国产另类| 成人欧美一区二区三区A片| 精品国产一区二区三区久久影院| 亚洲AV一二三区成人影片| 人澡人爽人妻精品A片二区| 护士喂我乳我脱她内裤| 色偷偷久久一区二区三区| 亚洲 自拍 另类小说综合图区| 丰满年轻岳欲乱中文字幕| 欧美精品一区二区少妇免费A片| 人体艺术在线观看| 亚洲女人被黑人巨大进入| 97人妻人人澡人人爽国产| 又大又粗又硬又爽又黄毛片| 天天爽天天爽夜夜爽毛片| 国产精品亚洲片在线观看不卡| 日本丰满白嫩BBWBBW| 欧美丰满大胆少妇XXXOOO| 亚洲熟女综合色一区二区三区| 处破女A片免费观看| 国产亚洲精品久久久久久久久动漫| 长篇乱肉合集乱500小说| 偷妻之寂寞难耐2中文字幕| 日本无码人妻丰满熟妇区| 人妻互换一二三区激情视频| 亚洲AV麻豆AⅤ无码电影| 人妻少妇乱子伦无码视频专区| 闺房床榻粗喘H娇女| 成人片色情免费观看网站| 日本乱妇乱熟乱妇乱色A片| 丰满大肥婆肥奶大屁股| 精品久久人人妻人人做人人玩| 小莹一夜五次高潮| 日日天干夜夜狠狠爱| 雯雯被四个男人拖进工地|