国产精品免费无遮挡无码永久视频,交换娇妻系列38部分阅读,天天AV天天翘天天综合网,丰满护士巨好爽好大乳小说

銷售熱線

19126518388
  • 技術文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術文章 > 分子克隆實驗---第三章:測序結果解讀

    分子克隆實驗---第三章:測序結果解讀

    發(fā)布時間: 2025-03-31  點擊次數(shù): 258次

    一代測序是克隆實驗中常見的下游實驗?,F(xiàn)代 DNA 測序技術源于 Sanger 鏈末端終止測序法,其工作原理與 Sanger 測序不同的是 4 組反應的雙脫氧核苷酸分別用不同的熒光分子標記,每個試管的產(chǎn)物在光激發(fā)下發(fā)出不同顏色的熒光,延伸反應和鏈終止完成后,將全部 4 組反應物混合,在同一泳道進行凝膠電泳,通過激光束激發(fā)熒光分析不同位置堿基的熒光顏色完成測序分析。


    一般情況下,測序信號文件多為 *.ab1 文件,該文件能夠得到每個堿基的測序峰型及整體質(zhì)量;*.seq 文件則為 ab1 文件導出得到的測序結果序列,ab1 文件中已具有堿基序列信息,因此 *.seq 文件可不作重點關注。


    一代測序的每次測序反應能夠產(chǎn)生約 600-900bp 堿基信息,測序開始的 5 端約 50bp 左右的測序信號不穩(wěn)定,檢測 800bp 左右之后信號開始衰減,各種波之間有重疊等情況。這部分結果信息不準確,不建議參考使用。

    理想狀態(tài)的測序信號應當是獨立單一的峰形信號,波峰與波谷清晰,峰與峰之間的距離均勻,波峰底部沒有雜峰干擾,此時得到的堿基信息可信度超高;測序信號出現(xiàn)雙峰、套峰等情況時,該處堿基信息可信度低,需要其他測序結果共同比對分析



           

    測序問題的主要原因:
    ◆ 套峰
    a) 全雙峰:多引物結合位點(菌液、質(zhì)粒);非特異擴增(PCR 產(chǎn)物);
    b) 前雙峰:多引物結合位點,其中一套模板測序中斷(菌液、質(zhì)粒);多引物結合位點(PCR
    擴增未純化產(chǎn)物);引物二聚體或小片段干擾(PCR 產(chǎn)物純化非切膠樣品);
    c) 中間雙峰:非單克?。ň骸①|(zhì)粒);堿基缺失或等位基因雙模板(PCR 擴增未純化產(chǎn)物);
    d) 后雙峰:非單克隆(菌液、質(zhì)粒);堿基缺失(PCR 產(chǎn)物)。


    ◆ 測序信號

    a) 無信號:引物結合位點不存在或被破壞;
    b) 信號差:引物或模板的質(zhì)量不高,或引物和模板匹配性低,或樣本濃度偏低;
    c) 信號衰減:可能因測序序列的特殊結構導致,如 Poly 結構、重復序列、回文結構、發(fā)卡結構、GC 富集、AT 富集等;若為正常峰形后逐漸衰減,可能模板反應量不足;
    d) 信號中斷:模板存在高級結構,導致 dNTP 和 ddNTP 在某位點無法與模板結合;
    e) 測序移碼:測序開端移碼可能是引物降解,局部移碼可能樣本存在高級結構;

    f) 測序底峰干擾:可能測序引物不純;可能測序樣品不純混有正、反向引物。


    優(yōu)化方案:套峰

    二聚體、小片段干擾:凝膠電泳,切膠純化回收;                                                          
    多引物結合位點:更換引物測序或反向測通;
    堿基缺失:構建單克隆后測序;
    非單克?。涸谳d體構建克隆正確下重新挑取單克隆測序;
    非特異性擴增:優(yōu)化反應條件重新制備;

    等位基因雙模板:構建單克隆后測序。


    測序信號

    無信號:更換引物或重新提供樣品測序;
    信號差:提供高質(zhì)量樣品測序;
    信號衰減:特殊結構導致衰減,建議反向測序拼接;若正常峰形后逐漸衰減:提供高質(zhì)量樣品;
    測序中斷:建議反向測序測通;
    測序底峰干擾:重新制備模板,引物 PAGE 膠純化。


    安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

    深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設在廣東,服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產(chǎn)品供應線,在各個領域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術支持與服務??梢栽诘谝粫r間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務。 專業(yè)的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持,深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴,安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應商,公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨,配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術支持,隨時為客戶提供服務












產(chǎn)品中心 Products
500篇艳妇短篇合午夜人屠| 囯产精品一品二区三区| 国产SM主人调教女M视频| 亚洲精品99久久久久中文字幕| 日文中字乱码一二三区别在哪里 | 小小拗女性BBWXXXX国产| 最近免费字幕中文大全| 精品无码国产自产拍在线观看蜜| 欧美 丝袜 自拍 制服 另类| 国产毛片精品一区二区色欲| 国产麻豆VIDEOXXXX实拍| 亚洲一区二区三区AV无码| 精品久久久久中文字幕| 国产免费观看久久黄AV片| 成人A片产无码免费视频在线观看| 娇妻被黑人粗大高潮白浆| 久久成人无码国产免费播放| 穷山沟里的荒唐性史| 西西GOGO顶级艺术人像摄影| 日本三级无码中文字幕DVD| 我帮妺妺洗澡忍不住C了她| 精灵梦叶罗丽第八季| 国产精品无码久久av| 天天躁日日躁狠狠躁日日躁黑人| 国产九九久久99精品影院| 再灬再灬再灬深一点舒服| 被老外做的下身都肿了| 爆乳2把你榨干哦OVA在线观看| 欧美巨大乳BBWVIDEOS| 小箩莉XXX69SEXHD| 最近中文在线字幕在线观看| 中国帅气体育生GARY| 手机在线看永久AV片免费| 日本137肉体摄影| AV无码精品一区二区三区| 全免费A级毛片免费看网站| 伊人久久综合无码成人网| 久久夜色精品国产噜噜麻豆| 妺妺第一次啪啪好紧| 亚洲综合激情五月丁香六月| 久久精品国产亚洲AV香蕉|